期刊简介
本刊是国内外公开发行的国家级学术刊物， 本刊以本专业的科研、教学人员和临床医师及从事骨质疏松的专业和管理人员为主要读者对象，报道本专业领域内国内、外科研的最新成就，临床诊疗经验，以及与此相关的基础理论研究。
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首页>中国骨质疏松杂志
- 杂志名称：中国骨质疏松杂志
- 主管单位：中华人民共和国民政部
- 主办单位：中国老年学和老年医学学会
- 国际刊号：1006-7108
- 国内刊号：11-3701/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 维普收录(中), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
沉默DKK1、Sost重组腺病毒载体的构建及其对MG63细胞增殖、ALP活性和钙离子浓度影响研究
万雷；黄宏兴；黄红；柴生颋；张志海；魏合伟；王凡；王吉利
关键词：DKK1, Sost, 沉默基因, 重组腺病毒, MG63细胞
摘要：目的 构建Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因沉默重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙离子浓度影响作用.方法 设计出特异性针对DKK1、Sost和无关对照序列(Scr),构建DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,用qPCR法和蛋白印记(Western blot)法选出沉默效率好的扩增DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,并用荧光显微镜观察计算病毒滴度.MG63细胞被分成空白对照组、沉默DKK1(Ad-shDKK1)组、沉默Sost(Ad-shSost)组、沉默DKK1+ Sost(Ad-shDKK1+ Ad-shSost)组4组,分别用优选出的沉默效率好的shDKK1和shSost腺病毒载体转染MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)检测观察细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度.结果 ①DKK1 pAd-shDKKl-1和Sost pAd-GFP-shRNA-2沉默效率高;②与空白对照组对比,沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默DKK1+ Sost组的细胞光吸收值(0D)、ALP活性测定值均升高,而钙离子浓度均降低,以沉默DKK1+ Sost组变化明显,组间比较具有统计学差异(P＜0.01和P＜0.05).结论 DKK1、Sost沉默可促进MG63细胞增殖、提高ALP活性,降低钙离子浓度,尤以二者同时沉默时的作用强.
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